PARR

Echevarne Veterinaria ofrece la técnica PARR para mejorar el diagnóstico oncológico en la especie canina y felina

¿Qué es?

PARR (“PCR Antigen Receptor Rearrengement”) es una técnica destinada a la detección de clonalidad y es de gran utilidad para la distinción entre linfoma y procesos inflamatorios. Los linfomas son, por definición, expansiones clonales derivadas de una sola línea celular, mientras que los procesos inflamatorios son policlonales.

¿Cuándo está indicada?

Fundamentalmente en aquellos casos en los que la morfología y el inmunofenotipaje no son conclusivos. Señalamos algunas situaciones en las que puede estar indicada la técnica de PARR:

  • Algunas formas de linfoma de bajo grado, denominados linfomas indolentes (casos de linfomas foliculares, linfomas de células del manto).
  • Identificación de linfomas intestinales, neoplasias que con frecuencia imitan procesos inflamatorios crónicos. Útil también en la distinción entre linfomas tímicos y timomas.
  • Identificación de Linfocitosis cutánea, probablemente una forma de linfoma indolente de célula T de aspecto histológico benigno.
  • Distinción entre leucemias y reacciones leucemoides.

¿Qué muestras debe ser remitidas?

La técnica permite el uso de tejidos frescos, tejidos fijados en formol, muestras en parafina (biopsias), sangre, médula ósea y material citológico..

¿Qué sensibilidad y especificidad tiene?

CaninaLa sensibilidad de la técnica en muestras de especie canina es de un 90% y su especificidad es del 92%*.

FelinaLa sensibilidad de la técnica en muestras de especie felina es de un 89% y su especificidad es del 96%*.

*Ambos factores dependen en buena parte del tipo de muestras empleado (tejido fijado o parafinado, tejido fresco), de los cebadores utilizados, del protocolo de PCR y de la resolución de la técnica de separación del producto de la PCR.

¿Cúal es el fundamento de la técnica?

Los linfomas son tumores hematológicos causados por la expansión clonal de linfocitos. La detección de la clonalidad se basa en el hecho de que los linfocitos contienen regiones de ADN que son únicas en longitud y secuencia.

Estas regiones únicas están mayoritariamente localizadas en los genes que codifican para la región CDR3 (Complementary Determining Region 3) tanto de las inmunoglobulinas como del receptor de células T. CDR3 es la región que tiene capacidad para la unión a Antígeno.

En las células B, CDR3 se produce por la recombinación de los genes V;D y J, mientras que en las células T , la recombinación se produce entre los genes V y J. Durante el proceso de recombinación, se añaden de 5 a 20 nucleótidos al azar dando lugar a la diversidad de secuencias y longitud.

Tras la obtención de material genético de la muestra se procede a la amplificación por PCR mediante cebadores específicos de la región VDJ (para las inmunoglobulinas) y VJ (para el TCR). La detección de los productos amplificados se realiza mediante el análisis de fragmentos usando un secuenciador automático. En caso de policlonalidad se obtiene una mezcla heterogénea de cadenas de diferente longitud mientras que en caso de monoclonalidad se obtiene un solo pico correspondiente a un tipo único de cadenas.

La configuración del loci genético para las inmunoglobulinas contiene 80 genes V, 6 genes D y entre 3 y 5 genes J.

Durante el desarrollo de las células T y B, por mecanismos de escisión, se juntan una región V y una D. En este proceso pueden añadirse o eliminarse nucleótidos en un número que varía de una célula a otra, lo cual hace que cada célula sea distinta de las demás.

El mismo proceso se repite con los genes D y J. Como resultado tenemos contigüidad entre los genes V, D y J y una longitud de cadena distinta para cada célula debido a la variabilidad en la adición o eliminación de nucleótidos. Cuando la célula se divide, su descendencia hereda la misma configuración VDJ que su progenitora. Para llevar a cabo la técnica, se aísla el material genético de la muestra. Mediante el empleo de cebadores se amplifica la región VDJ:

  • En caso de clonalidad se obtienen siempre cadenas gemelas:


  • En caso de policlonalidad se obtiene una mezcla heterogénea de cadenas de distinta longitud:


La lectura de las diferentes longitudes se traduce en una gráfica:

REFERENCIAS

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